金年会jinnian酶活性测定服务

2016-03-25

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金年会jinnian酶活性测定服务

上海金年会jinnian的生物部在体外生物学领域拥有丰富广泛的经验，顺利获得酶水平测定、细胞水平测定、细胞生物学、生物化学、体外同位素测定、稳定细胞株建立、基因敲除、RNAi 和 MicroRNA 技术等，为全球客户给予一套完整的生物学服务。其中，酶活性测定（酶活性检测）是金年会jinnian体外生物学服务的业务之一。

多种技术平台

AlphaScreen 分析试验

Z'-LYTE 分析试验

Adapta® 通用激酶分析

Kinase-Glo® 激酶发光检测

ADP-Glo™ 激酶检测分析

配体结合试验

酶联免疫 ELISA 分析

HTRF 均相时间分辨荧光检测

多样性靶点和应用

金年会jinnian酶活性检测服务覆盖以下靶点与应用，满足从靶点确认到化合物筛选的多元化研发需求：

激酶

GPCR

蛋白酶

钾-ATP酶

转录因子

细胞激素

代谢酶

生物标记

蛋白结合

蛋白相互作用

化合物筛选

咨询服务

什么是酶活性（酶活力）？

酶活性又称酶活力，是指酶催化特定化学反应的能力。酶活力可以用一定条件下每次反应的速度来表示——反应速度愈快，就表明给定的酶溶液或组织提取液中的酶活力愈高。

酶活性测定的原理

酶活性测定的原理是顺利获得直接测定反应生成物的浓度变化，以单位时间内反应物的减少量或生成物的增加量来表示酶促反应速率。换言之，只要能够准确捕捉底物消耗或产物生成的动态过程，即可定量表征酶的催化活性。

两大酶活性测定方法对比

根据酶促反应时间选择的不同，酶活性测定方法可分为固定时间法和陆续在监测法（又称速率法）两类：

① 固定时间法

测定酶促反应开始后一段时间内底物的减少量或产物的增加量。

优点：
方法简单，操作门槛低，适合初筛场景。

局限：
难以确定所测时间段内酶促反应是否处于线性期，结果准确性受限。

② 陆续在监测法（速率法）

陆续在测定底物或产物随时间的变化量，动态反映酶促反应全过程。

优点：
能动态观测酶促反应进程，明显找到反应线性期，结果准确可靠；标本和试剂用量少，可在较短时间内完成测定。

局限：
对环境要求高，需精确控制温度、pH 值和底物浓度等反应条件，并要求仪器具有恒温装置及自动检测功能。

六种常见酶活性测定手段

在实际检测中，可根据酶促反应特性选择以下测定手段：

1、耦合反应法：借助指示酶偶联反应间接测定产物变化；
2、化学测定法：利用化学反应定量产物或底物；
3、放射同位素法：以放射性标记底物追踪反应进程，灵敏度极高；
4、测压法：适用于伴随气体生成或消耗的反应体系；
5、电极法：顺利获得离子选择性电极实时监测反应体系中离子浓度变化；
6、高效液相色谱法（HPLC）：高分辨率分离并定量底物与产物，适用于复杂体系。

影响酶活性测定的五大因素

酶浓度

通常使底物过量，以确保酶可以充分与底物结合并发挥其催化功能。

底物、辅因子的种类和浓度

选择合适的底物种类和浓度：若所测酶专一性不强、可作用于多种底物，第一时间需决定选择哪一类底物作为测此酶的底物；确定底物种类后，关键在于选择合适的底物浓度。

辅因子、活化剂的种类和浓度：广义上说，凡能促进酶及反应物进入活化状态从而加速酶催化反应的物质均可称为辅因子，其种类繁多，需针对性优化。

反应体系的最适 pH、缓冲液的种类和浓度

在酶反应其他条件不变的情况下，不同 pH 下可取得不同类型的酶活性-pH 关系曲线，其中酶活性最高处的 pH 称为最适 pH。缓冲液含有大量离子，可能影响酶蛋白的构型或底物的解离程度，从而影响酶活性。

温度的控制

测定酶活性时，需酶和底物在一定温度下作用一段时间，期间温度可能使酶失活，不同酶在耐热性上差异很大。现在常规实验室越来越多地使用 37℃——温度升高，反应速度快、灵敏度高。无论选用何种温度，由于酶反应受温度影响很大，测定时间内反应体系的温度变化应控制在 ±0.1℃ 以内。使用国产普通恒温水浴箱测定酶活性并不合适，应使用带有搅拌器的高级恒温水浴。

其它影响因素

在其他影响因素中，对酶活性测定影响最大的是抑制剂的作用，实验设计时应予以充分排查与规避。